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人的幽門螺桿菌IgG(HP IgG)酶聯免疫分析(ELISA)

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  • 更新日期:2011-04-27 15:13
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詳細介紹

試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用      目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中幽門螺桿菌IgG(HP IgG)含量。
實驗原理:
    本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人的幽門螺桿菌IgGHP IgG)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入幽門螺桿菌IgG(HP IgG),再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的幽門螺桿菌IgG(HP IgG)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人的幽門螺桿菌IgG(HP IgG)濃度。
試劑盒組成
試劑盒組成
      48孔配置
96孔配置
保存
說明書
1份
1份
 
封板膜
2片(48)
2片(96)
 
密封袋
1個
1個
 
酶標包被板
1×48
1×96
2-8保存
標準品:90ng/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8保存
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8保存
酶標試劑
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
樣品稀釋液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
顯色劑A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
顯色劑B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
終止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8保存
濃縮洗滌液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8保存
樣本處理及要求
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作步驟
1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為60 ng/L,40 ng/L ,20 ng/L,10 ng/L,5 ng/L)。
2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
文本框:  計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   
在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD     
值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      
倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值      
代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      
倍數,即為樣品的實際濃度。                  
                                             
(此圖僅供參考)
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。
2.批內與批見應分別小于9%和11%
 
檢測范圍:                                              
3 ng/L -70 ng/L                                         
                           
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8
2.有效期:6個月

chzbio.biogo.net/
 
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